Jak zamrozić-wysuszyć kulturę bakteryjną (liofilizacja)

Liofilizacja lub liofilizacja to krótka procedura laboratoryjna

Liofilizacja, nazywana również liofilizacją lub kriokodowaniem, jest procesem usuwania wody z produktu po jego zamrożeniu (a następnie umieszczeniu pod próżnią), umożliwiając zmianę lodu ze stałej w parę bez przechodzenia fazy ciekłej. Lody (lub inne zamrożone rozpuszczalniki) są usuwane z produktu w procesie sublimacji, a związane cząsteczki wody są usuwane w procesie desorpcji.

Podstawy liofilizacji

Jednym z najlepszych sposobów przechowywania kultury bakterii, grzybów, drożdży lub innych mikroorganizmów przez długi czas jest zastosowanie procesu liofilizacji. Ta krótka procedura laboratoryjna może być przeprowadzona za pomocą dowolnej dostępnej w handlu liofilizatora, która zachowa Twoją kolekcję kultur. Ponieważ liofilizacja jest najbardziej złożoną i drogą formą suszenia, proces ten jest zwykle ograniczony do delikatnych, wrażliwych na ciepło materiałów o wysokiej wartości. Substancje, które nie zostały uszkodzone przez zamrożenie, zwykle można liofilizować, aby przechowywanie w chłodni było niepotrzebne.

Proces ten może trwać zaledwie trzy godziny, a nawet 24 godziny, nie licząc czasu wzrostu kultury.

Proces liofilizacji krok po kroku

1. Najpierw hoduj przez noc kulturę lub trawnik drobnoustroju na LB lub na innej odpowiedniej pożywce agarowej.

2. Następnie przygotuj sterylne fiolki z zagniatanym kapslem przez autoklawowanie z wyprzedzeniem, z zaślepkami (gumowymi korkami) umieszczonymi luźno na wierzchu. Przed autoklawowaniem umieść etykiety papierowe z oznaczeniem hodowli wewnątrz probówek. Alternatywnie, użyj probówek z nakrętkami zaprojektowanymi do sterylności .

1. Dodaj 4 ml buforu liofilizacyjnego na płytkę. W razie potrzeby komórki można zawiesić za pomocą sterylnego pręcika szklanego.

2. Szybko przenieś zawiesinę hodowli do wysterylizowanych fiolek. Dodać około 1,5 ml na fiolkę. Uszczelnij gumową osłoną.

3. Zablokuj zawiesinę hodowlaną wewnątrz fiolek, umieszczając fiolki w zamrażarce o temperaturze -20 stopni Celsjusza.

1. Po zamrożeniu hodowli przygotować liofilizator, włączając go i pozostawiając czas na ustabilizowanie się odpowiedniej temperatury i warunków próżni. Zrób to zgodnie z instrukcjami producenta dla danej marki liofilizatora, którego używasz.

2. Ostrożnie i aseptycznie, luźno umieścić fiolki na fiolkach, aby wilgoć mogła się wydostać podczas procesu liofilizacji i umieścić fiolki w komorze liofilizatora. Zastosuj podciśnienie do komory zgodnie z instrukcjami producenta.

3. Pozostawić czas hodowli do całkowitej liofilizacji (wysuszyć). Może to potrwać od kilku godzin do nocy, w zależności od objętości każdej próbki i liczby próbek.

4. Wyjmij próbki z komory liofilizatora zgodnie z instrukcją producenta i natychmiast zamknij fiolki gumowymi kapslami, a następnie szczypcami zagniatanymi.

5. Przechowuj liofilizowaną hodowlę w temperaturze pokojowej.

Produkty, które będziesz potrzebować

• Freeze-suszarka
• Odżywcze lub inne odpowiednie płytki agarowe (i inkubator do hodowli)
• Bagietka laboratoryjna
• Bufor liofilizacji
• Crimp-top fiolki z gumowymi korkami (i zaciskarki do nakładania czapek)
• Zamrażarka

<sub>Odniesienie:

SP Scientific. Podstawowe zasady liofilizacji. http://www.spscientific.com/freeze-drying-lyophilization-basics/</sub>