Ten bufor służy do rozdziału elektroforezy DNA
Bufor TBE jest szczególnie przydatny do oddzielania mniejszych fragmentów DNA (MW <1000), takich jak małe produkty trawienia enzymem restrykcyjnym .
TBE ma większą pojemność buforową i da większą rozdzielczość niż bufor TAE . Bufor TAE jest roztworem złożonym z zasady Tris, kwasu octowego i EDTA (octan Tris-EDTA).
TBE jest generalnie droższy niż TAE i hamuje ligazę DNA, co może powodować problemy, jeśli zamierzone są kolejne etapy oczyszczania i ligacji DNA. Wykonaj trzy proste kroki, aby dowiedzieć się, jak utworzyć bufor TBE. Tworzenie tego bufora nie powinno trwać dłużej niż 30 minut. Oto jak:
Przygotuj zapasowy roztwór EDTA
Roztwór EDTA (kwas etylenodiaminoczterooctowy) powinien być przygotowany wcześniej. EDTA nie przejdzie całkowicie do roztworu, dopóki pH nie zostanie ustawione na około 8,0. Dla 500-mililitrowego roztworu podstawowego 0,5 M EDTA odważ 93,05 gramów soli disodowej EDTA (FW = 372,2). Następnie rozpuścić w 400 ml dejonizowanej wody i wyregulować pH za pomocą NaOH. Następnie uzupełnić roztwór do końcowej objętości 500 mililitrów.
Przygotuj zapasowe rozwiązanie TBE
Zrobić stężony (5x) roztwór podstawowy TBE ważąc 54 g zasady Tris (FW = 121,14) i 27,5 g kwasu borowego (FW = 61,83) i rozpuścić w około 900 ml dejonizowanej wody. Następnie dodać 20 mililitrów 0,5 M EDTA (pH 8,0) i doprowadzić roztwór do końcowej objętości 1 litra.
Ten roztwór można przechowywać w temperaturze pokojowej, ale w starszych roztworach tworzy się osad. Przechowuj bufor w szklanych butelkach i odrzuć, jeśli utworzył się osad.
Przygotuj działające rozwiązanie TBE
Do elektroforezy w żelu agarozowym można zastosować bufor TBE o stężeniu 0,5x (rozcieńczenie 1:10 stężonego roztworu podstawowego). Rozcieńczyć roztwór podstawowy przez 10x w wodzie dejonizowanej. Końcowe stężenia substancji rozpuszczonej wynoszą 45 mM Tris-boranu i 1 mM EDTA. Bufor jest teraz gotowy do użycia w prowadzeniu żelu agarozowego .
Czego potrzebujesz
Aby utworzyć bufor TBE, potrzebujesz tylko czterech substancji. Pozostałe pozycje na tej liście to sprzęt. Cztery wymagane substancje to sól disodowa EDTA, zasada Tris, kwas borowy i dejonizowana woda.
Jeśli chodzi o sprzęt, będziesz potrzebował odpowiednio miernika pH i standardów kalibracji. Oprócz tego będziesz potrzebował zlewek lub kolb o pojemności 600 mililitrów i 1500 mililitrów. Wyczerpujące zapotrzebowanie na sprzęt to cylindry z podziałką, mieszadła i płytki do mieszania.
Sprawdź inwentarz w laboratorium, z którego będziesz korzystać, aby upewnić się, że masz wszystko, czego potrzebujesz, zanim zaczniesz. Nic nie jest gorsze, niż konieczność zatrzymania się w trakcie przygotowywania rozwiązania, ponieważ wyczerpały się odpowiednie materiały.
Jeśli twoje laboratorium jest w szkole lub miejscu pracy, sprawdź u odpowiednich pracowników, czy mają wszystkie przedmioty w magazynie. Może to w końcu zaoszczędzić czas i energię.