Jak zrobić ten immunohistochemiczny bufor do barwienia
Sól buforowana fosforanem (PBS) jest roztworem buforowym, który jest powszechnie stosowany do barwienia immunohistochemicznego (IHC) i jest często stosowany w badaniach biologicznych. PBS to wodny roztwór soli zawierający wodorofosforan sodu, chlorek sodu oraz, w niektórych przypadkach, chlorek potasu i diwodorofosforan potasu.
Barwienie immunohistochemiczne
Immunohistochemia odnosi się do procesu wykrywania antygenów, takich jak białka w komórkach fragmentu tkanki, z wykorzystaniem zasady przeciwciał wiążących się specyficznie z antygenami w tkankach biologicznych.
Barwienie immunofluorescencyjne było pierwszą metodą barwienia immunohistochemicznego.
Antygeny stają się widoczne po sprzężeniu z przeciwciałami za pomocą barwników fluorescencyjnych z powodu reakcji wiązania antygen-przeciwciało Proces ten zachodzi, gdy jest aktywowany przez ekscytujące światło o określonej długości fali pod mikroskopem fluorescencyjnym.
Osmolarność i stężenia jonów w roztworach odpowiadają stężeniom ludzkiego ciała - są izotoniczne.
Przepis na PBS
Możesz przygotować PBS na kilka sposobów. Istnieje wiele formuł. Niektóre z nich nie zawierają potasu, a inne zawierają wapń lub magnez .
Ten przepis jest stosunkowo łatwy. Jest przeznaczony do 10-krotnego roztworu podstawowego PBS (0,1 M). Możesz jednak stworzyć rozwiązanie podstawowe 1X lub zacząć od tego przepisu 10X i rozcieńczyć go do 1X.
Cały proces trwa około 10 minut.
Dostępna jest również opcja dodawania animacji.
Co trzeba zrobić, aby bufor PBS
- Monozasadowy fosforan sodu (bezwodny)
- Dwuzasadowy fosforan sodu (bezwodny)
- Chlorek sodu
- Łuski i ważenie łodzi
- Mieszadło magnetyczne i mieszadło
- Sonda pH, która została skalibrowana i odpowiednie rozwiązania do regulacji pH
- Kolba miarowa o pojemności 1 litra
- Tween 20 (opcjonalnie)
Jak zrobić sól fizjologiczną buforowaną fosforanem (PBS)
Odważyć 10,9 g bezwodnego dwuzasadowego fosforanu sodu (Na2HPO4), 3,2 g bezwodnego fosforanu sodu jednozasadowego (NaH2PO4) i 90 g chlorku sodu (NaCl).
Rozpuścić w zaledwie 1 litrze wody destylowanej.
Dostosuj wartość pH do 7,4 i doprowadź roztwór do końcowej objętości 1 l.
Przed użyciem należy rozcieńczyć 10X i w razie potrzeby wyregulować pH.
Możesz przygotować roztwór PBS zawierający 0,5% Tween 20, dodając 5ml Tween 20 do roztworu 1L.
Wskazówki dotyczące tworzenia bufora PBS
Przechowuj bufor w temperaturze pokojowej po przygotowaniu roztworu PBS.
Nie-bezwodne odczynniki mogą być podstawione, ale musisz ponownie przeliczyć odpowiednią masę każdego z nich, aby pomieścić dodane cząsteczki wody.
Zastosowania soli fizjologicznej buforowanej fosforanem (PBS)
Sól fizjologiczna buforowana fosforanem ma wiele zastosowań, ponieważ jest izotoniczna i nietoksyczna dla większości komórek. Może być stosowany do rozcieńczania substancji i jest często używany do płukania pojemników z komórkami. PBS może być stosowany jako rozcieńczalnik w różnych metodach do suszenia biomolekuł, ponieważ cząsteczki wody znajdujące się w jego obrębie będą, na przykład, zbudowane wokół substancji-białka. Będzie "osuszony" i unieruchomiony na twardej powierzchni.
Wartość pH pozostaje stała i stała, aby zapobiec zniszczeniu komórek.
Cienka warstewka wody wiążąca się z substancją zapobiega denaturacji lub innym zmianom konformacyjnym. Bufory węglanowe można stosować do tego samego celu, ale z mniejszą skutecznością.
PBS można także wykorzystać do określenia widma referencyjnego podczas pomiaru adsorpcji białka w elipsometrii.